01、血清的颜色如何?
为何有的胎牛血清颜色偏红,而有的偏黄?是因为胎牛血清颜色是由血红蛋白(鲜红)和胆红素(黄)决定的,主要是受血红蛋白影响。血红蛋白含量很低时,含少量胆红素,呈淡黄或金黄。血红蛋白含量高时,会呈现淡红色。
需要长期保存的血清必须储存于-20℃冰箱(未开封血清有效期为5年)。若存放于4℃,请勿超过1个月,若一次无法用完一瓶,建议将血清无菌分装并冷冻。
02、血清如何解冻,使用前是否需要过滤?
血清解冻需采用逐步解冻法:将血清从-20℃冰箱放入4℃冰箱中溶解一天,然后移入室温,待全部溶解后再分装。在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀(小心勿造成气泡),减少沉淀生成。切勿直接将血清从-20℃转入37℃解冻,这样因温差较大易造成蛋白质凝结并出现沉淀。
经过3次0.1μm过滤,出厂经过检测并且会使用三种以上的细胞株进行培养测试及无菌检测,污染几率非常非常非常(重要的事情说三遍)低。通常细胞污染有非常多的可能性,根据协助使用者进行分析检测,结果表明绝大部分都是因人为操作失误导致污染。因此买来的血清不需要再次进行过滤。
肉眼和光学显微镜所能观察到的微粒大小。由于我们的血清是经过3次0.1μm过滤,因此若肉眼可以观察到异物时,可以考虑:
是否血清溶解后蛋白质凝集
是否操作时导入污染物
03、为什么血清中会有沉淀生成,主要成分是什么,会对实验有什么影响?
血清中沉淀主要有:纤维蛋白(絮状沉淀),胎球蛋白[1],脂蛋白,冷凝集素,玻连蛋白,磷酸钙(显微镜下小黑点沉淀),胆固醇等。
原因:造成沉淀的主要原因是温度的改变。热灭活,反复冻融,长期储存于2-8℃或者室温。
预防:非必要,不用热灭活;避免反复冻融;-20℃保存;4℃全融(期间间断摇晃均匀);2000rpm离心5分钟(不建议用0.2um滤膜过滤) ,取上清使用。
04、黑胶虫是来源于血清吗?
目前科学界对黑胶虫的身份并无定论, 通常是显微镜下观察到密密麻麻的小黑点在培养基中自主游动,就称为黑胶虫污染。本公司技术服务部”Dr.Cell” 目前检测的数十个所谓”黑胶虫”样本,其中62%为细菌(如Sphingomonas paucimobilis,Blastomonas natatoria strain),38%为支原体(如:Mycoplasma hyorhinis,Mycoplasma pulmonis strain)。黑胶虫在镜下的典型特征呈卵圆状、球状、杆状等,可引起细胞生长迟缓或裂解凋亡。目前没有充分的数据表明黑胶虫来源于血清,因为其尺寸远大于血清过滤时所用的0.1微米(μm)滤膜。建议各位老师通过使用三抗(Cat#: 03-032-1B)外加支原体处理试剂(Cat#: 03-038-1B)尝试杀灭黑胶虫。
05、血清存在批间差吗?
因为血清来源于动物,其组成成分有1000种左右,且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。每个批号的组分和百分比含量都是不固定的,所以批间差异是存在的。
建议先进行批号测试,筛选出合适批号,购买半年甚至一年以上的用量,避免批间差造成实验波动(胎牛血清在-20℃保存可达5年)。