Lipo3000细胞转染试剂转染效率高,细胞毒性小,适合各种核酸分子或蛋白质的转染实验。细胞转染是外源基因进入真核细胞的一种重要方法。这些外源DNA或RNA通过转染试剂的包装辅助才能顺利进入细胞,发挥相应的作用,进而研究其细胞功能及相应的影响。广泛应用于基因功能研究、调控基因表达、癌症、疾病模型相关研究和重组蛋白研究等生物学试验。
1.质粒质量:请务必使用高纯度无内毒素转染级质粒。通过260nm光吸收测定DNA浓度,260nm/280nm比值确定DNA纯度(比值应该在1.8~2.0的范围之内)。如有可能,请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。
2.细胞条件:使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保细胞没有被细菌、真菌或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞,请在转染前至少传代两次。建议使用GIBCO或者李记生物的胎牛血清培养细胞。
3.细胞培养液要求:EZTrans细胞转染试剂可用于有血清培养基的转染,并且转染前不需要换培养基。但是,制备转染复合物时要求用无血清培养基稀释DNA和转染试剂,因为血清会影响复合物的形成。确保细胞培养液没有被细菌、真菌或支原体污染。转染时培养液中不添加抗生素。
4.DNA浓度和EZTrans细胞转染试剂量的优化:DNA浓度和转染试剂使用量受细胞类型及其他实验条件影响,初次使用应优化DNA浓度和转染试剂量以得到最大的转染效率。使用者可尝试每1μgDNA使用1~4μL体积线性PEI转染试剂进行优化。DNA和转染试剂的比例,通常推荐是1:2~1:5。