3D4/21猪肺泡巨噬细胞

接受后处理

1) 收到细胞后，请检查是否漏液 ，如果漏液，请拍照片发给我们。

 2) 请先在显微镜下确认细胞生长 状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。

 3) 弃去T25瓶中的培养基，添加 6ml本公司附带的*培养基。

 4) 如果细胞密度达80%-90%请及 时进行细胞传代，传代培养用6ml本公司附带的*培养基。

 5) 接到细胞次日，请检查细胞是 否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。
 

3D4/21猪肺泡巨噬细胞

培养操作

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

 2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。      
   
     1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

     2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。  
   
     3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

     4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

 3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

    1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

    2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。

    3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
 

培养注意事项