EOL-1人类嗜酸性粒细胞性白血病细胞

EOL-1人类嗜酸性粒细胞性白血病细胞

产品名称：EoL-1 cellS

中文名称：人类嗜酸性粒细胞性白血病；人类嗜酸性粒细胞性白血病细胞株

代数：第四代

运输方式：复苏活细胞或冻存细胞

细胞数量：5*100000个

货期：复苏细胞10个工作日，冻存细胞2-3个工作日

EoL-1细胞，人类嗜酸性粒细胞性白血病细胞株比较娇贵，养它如同养孩子，EoL-1细胞培养技术（细胞培养、培养基、胎牛血清、细胞活化与复苏）更多详细信息，请客服：！

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收到细胞株包裹时， 请检查细胞株冷冻管是否有解冻情形， 若有请立即通知。细胞株请尽速开始培养， 或立即冷冻保存(置于–70 °C， 隔夜后， 移到liq N2)。细胞复苏的原则－快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。

EOL-1人类嗜酸性粒细胞性白血病细胞

操作步骤：

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

 2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。      
     1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
     2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。     
     3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加1-2mL 培养液后吹匀。
     4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
 3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
    1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
    2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
    3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

注意事项：
1.动作要快，胰酶消化，换液什么，细胞暴露在空气中的时间越少越好。另外，要掌握好胰酶消化时间，所谓的细胞状态差，很多时候是传代的原因。
3.有时间的话，需要细胞计数，传相应数目的细胞到培养皿中，可以大致清楚细胞的生长曲线，不会临时要处理，手足无措。
3.要做什么心里要非常清楚，合理安排时间，细胞房的实验穿插进行，可以节省很多时间，也不会耽误别人的实验。
4.个人的实验器具自己收一套，不要和别人混用，zui近换了什么新的东西稍微记一下，试剂一旦怀疑污染，马上丢。
5.细胞房不能进去太多人，避免相互干扰。