HA人星形胶质细胞

HA人星形胶质细胞

 【产品规格】25cm2 培养瓶
【说明书】说明书随货发送，您也可以直接联系我司在线销售人员索取
【运输和保存】可选择干冰运输及发送
复苏基本技术:
（a）从液氮容器中取出细胞冻存管后，立即将细胞冻存管直接浸入37%水浴中，在1－2分钟内摇动细胞冻存管至冻存的细胞融化。
（b）用75%酒精消毒细胞冻存管后，小心打开盖子，用吸管吸出细胞悬浮液至15ml离心管中，缓慢加入5ml培养基后800rpm离心5分钟，弃上清，加3－5ml培养基重悬至细胞培养瓶中，然后放入5%CO2、95%空气、37℃培养箱静置培养。
注：建议使用新鲜配制的培养体系
（c）另外，细胞计数，确定细胞数量。
（d）24小时更换一次培养液，继续在5%CO2,  95%空气、37℃培养箱静置培养。
注：建议使用新鲜配制的培养体系
细胞注意事项：
①在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作
②培养基于 4℃条件下可保存 3-6 个月
③传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态
④该细胞只可用于科研
YB-ATCC-2736    MG-63(骨肉瘤细胞)    进口美国ATCC细胞株，1ml/株
YB-ATCC-2737    HEC-1-B(子宫内膜腺癌细胞)    进口美国ATCC细胞株，1ml/株
YB-ATCC-2738    SW1353(骨肉瘤细胞)    进口美国ATCC细胞株，1ml/株
YB-ATCC-2739    ES-2(卵巢透明细胞癌细胞)    进口美国ATCC细胞株，1ml/株
YB-ATCC-2740    Saos-2(成骨肉瘤细胞)    进口美国ATCC细胞株，1ml/株
YB-ATCC-2741    MDA-MB-468(乳腺癌细胞)    进口美国ATCC细胞株，1ml/株
YB-ATCC-2742    SK-MES-1(肺鳞癌细胞)    进口美国ATCC细胞株，1ml/株
YB-ATCC-2743    MDA-MB-435S(乳腺癌细胞)    进口美国ATCC细胞株，1ml/株
YB-ATCC-2744    NCI-H661(大细胞肺癌细胞)    进口美国ATCC细胞株，1ml/株
YB-ATCC-2745    ZR-75-1(乳腺癌细胞)    进口美国ATCC细胞株，1ml/株

 HA人星形胶质细胞

 操作步骤：

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

 2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。      
     1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
     2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。     
     3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加1-2mL 培养液后吹匀。
     4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
 3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
    1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
    2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
    3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

注意事项：

1.动作要快，胰酶消化，换液什么，细胞暴露在空气中的时间越少越好。另外，要掌握好胰酶消化时间，所谓的细胞状态差，很多时候是传代的原因。
3.有时间的话，需要细胞计数，传相应数目的细胞到培养皿中，可以大致清楚细胞的生长曲线，不会临时要处理，手足无措。
3.要做什么心里要非常清楚，合理安排时间，细胞房的实验穿插进行，可以节省很多时间，也不会耽误别人的实验。
4.个人的实验器具自己收一套，不要和别人混用，zui近换了什么新的东西稍微记一下，试剂一旦怀疑污染，马上丢。
5.细胞房不能进去太多人，避免相互干扰。