HCC-78人肺腺癌细胞

HCC-78人肺腺癌细胞

【中文缩写】    HCC-78细胞

 【背景资料】    见细胞说明书

 【产品来源】    细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国内外著名大学建系

     提供贴壁、半贴壁、悬浮、半悬浮、贴壁与悬浮混合等细胞特性，一般细胞培养PBS量是10%，如果出现细胞状态不良情况，可以提高PBS量到15%，待细胞稳定后，调回PBS量10%，对于初次实验者，一般细胞培养，都需要加入双抗防止细胞污染，细胞汇合度达到90%，我们开始寄送，细胞这样可以保持细胞收到时，良好的细胞活力。复苏细胞注意事项：

1收到细胞后当天换液，全部更换成客户自己的新鲜培养基，放进培养箱，第二天再消化。

2边观察边消化，根据细胞的形态，终止消化时间，采取以半分钟间隔吹打细胞边缘，如可吹打下来，即终止消化。客户摸索比较好的消化时间。

3随细胞有一份细胞操作说明书，请客户仔细查看。

4记得加1%双抗，降低被污染的概率。另外尽早冻存留种，以备后用。

5售后时间为一周，仅限于细胞本身的质量问题，而因乙方自己不当操作（不规范操作，消化过度，不加双抗导致的污染等）导致的细胞问题不在售后范畴。

6收到细胞后，如细胞状态不佳，或培养中遇到问题，烦请当天尽快联系，以便处理。当天及时反馈细胞情况和细胞照片是售后跟踪处理重要的参考依据，请您务必重视。

7刚收到细胞时，胎牛血清可以用15%培养两三天，利于细胞尽快恢复状态，细胞状态稳定后，再调回10%即可。

（其中1,2条针对于贴壁细胞，悬浮细胞详情请见细胞操作说明书）"   

    复苏T25培养瓶(一瓶)或冻存1ml冻存管（两支）

        【产品规格】    1*10（6）

        【安全级别】    1

        【产品种属】    人

        【组织来源】    肺

        【细胞形态】    上皮细胞样

        【细胞特性】    贴壁

"细胞培养基的选择和使用：

MEM：成分简单，细胞贴壁细胞

DMEM：分高糖型和低糖型。

IDMEM：适合细胞密度低，生长困难的细胞。如杂交细胞的筛选，DNA转染后转化细胞的筛选培养。

RPM1640：应用*泛的培养基之一。悬浮细胞培养，主要针对淋巴细胞，也适合其他细胞。

199、109培养基：成分齐全，培养效果较好。

F10培养基：适合小鼠及人类二倍体细胞培养。

F12培养基：适合单细胞分离培养及无血清培养。

McCoy’s5A培养基：特别适合原代细胞及较难培养细胞的生长。"    95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

           细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌

        【培养条件】    详见细胞说明书

        【传代方法】    建议1:2-1:3 两天换液一次

        【冻存条件】    详见细胞说明书

        【主要文献】    请具体查阅相关发表文章

细胞传代培养的胰酶消化法：

传代培养：是指细胞从一个培养瓶以1：2或1：2以上的比例转移，接种到另一培养瓶的培养。传代细胞，可根据不同细胞采取不同的方法进行细胞传代。贴壁生长的细胞用消化法传代，部分贴壁的细胞用直接吹打或用硅胶软刮的刮除法传代。悬浮细胞可采用加入等量新鲜培养基后直接吹打分散进行传代，或用自然沉降法加入新培养基后再吹打分散进行传代。

HCC-78人肺腺癌细胞

培养步骤

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备基础培养基( GIBCO，，添加NaHCO3 1.5g/L，丙酮酸钠 0.11g/L)；优质胎牛血清，10%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

细胞注意事项：

1.收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2.先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置数小时（4h左右），稳定细胞状态，切忌在温箱内静置过夜。

3.静置后镜检，拍照，记录细胞状态。建议传代后也拍照记录细胞生长情况。

4.  悬浮细胞：将细胞瓶内液体都转移至无菌离心管内，1000 转/分钟离心5min，培养基上清可备用，管底细胞沉淀用培养基重悬。镜检时若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞瓶内培养；若密度未超过80%，细胞悬液移至原瓶继续培养，待达到80%时再正常传代。备注：聚团生长慢，有密度依赖，必须使用T25培养瓶竖立培养，3天一次半量换液一次，1-2周传代一次。

贴壁细胞：若细胞密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，收集细胞瓶内的培养基，留8ml继续培养至80%左右再传代，瓶盖可稍微拧松。备注：细胞贴壁慢，传代后细胞放2天不动。

5.细胞瓶内的培养基含血清和双抗，可收集后4℃保存备用，可补加2%血清。刚开始传代时建议一半用细胞瓶内的培养基，一半用客户自备的培养基，使细胞逐渐适应培养条件，以免因不适应而造成生长状态不佳。