HL-60人早幼粒白急性血病细胞

HL-60人早幼粒白急性血病细胞

 细胞培养注意事项问题解答
 
       细胞培养技术解答
 培养基生产和使用常见问题
1.低血清培养基能用肉眼判断其pH值吗？
   答：低血清培养基中酚红的含量与普通培养基中的酚红含量不同，不能通过肉眼观察或通过经验来判定pH值，建议使用pH计进行测定。
2.低血清培养基的缓冲系统是什么？
   答：平衡盐一般是由无机盐及葡萄糖组成的。平衡盐有Hanks′系统、Earle′s系统、Dulbecco′s磷酸缓冲盐系统等。199系列培养基、MEM系列培养基均有Hanks′系统的培养基及Earle′s系统的培养基。但是有些培养基均不是以上常规的平衡盐系统，例如RPMI 1640培养基、F12培养基。MEM(SLM)低血清培养基的平衡盐系统也不是常规的平衡盐系统，该平衡盐系统的缓冲能力强于常规平衡盐系统的缓冲能力。
3.谷氨酰胺溶液和碳酸氢钠的配制方法是什么？
   答：以0.2mol/L的 L-谷氨酰胺配制为例：称取L-谷氨酰胺2.92g，加注射用水100ml，充分搅拌混匀。用0.2μm滤膜正压过滤除菌。溶液应在4℃下避光保存，2周内使用。以7.5% NaHCO3的配制为例：称取NaHCO37.5g溶于100ml蒸馏水中过滤除菌。
4.什么培养基中可以省去加酚红？
   答：酚红在培养基中用作pH值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。酚红本身对生物制品质量并不会产生影响，可以通过纯化技术去除，但酚红在无血清培养基可能带来胞内钠/钾失衡，影响细胞生长，当然这种作用能被血清所中和或减轻。酚红并不是培养基中必需的一种成分，很多国外的疫苗或抗体生产企业在生产过程中都使用无酚红培养基。
5.放置在冰箱中的培养基颜色会发生变化，为什么？
 
     答：培养基保存于4℃冰箱中，培养基内CO2 会逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性。而培养基中酸碱指示剂(通常为phenol red)的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱后再用于细胞培养将造成细胞生长停滞或死亡。培养基偏碱时，可以通入无菌过滤的CO2，以调整pH值。
6.无血清培养与有血清培养使用的抗生素量一样吗？
    答：当在无血清培养基中添加抗生素时，降低至少在有血清培养基中所使用浓度的50%。因为血清中的蛋白会结合和灭活一些抗生素。而在无血清培养条件下，抗生素不被灭活。
7.培养基中添加了血清和抗生素后，可长期保存吗？
    答：一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。
8.什么是个性化培养基？它有什么优点？
    答：根据细胞类型、培养方式和生产工艺等特点所定制的培养基，即个性化培养基。个性化培养基在国外生物制药企业被普遍采用，个性化培养基可以为细胞生长提供充足的营养物质，能提高细胞的生长速率、培养密度、以及延长细胞维持时间；也可以为细胞生长提供均衡的营养供给，减少细胞有害代谢物质的积累，降低对细胞生长的危害；同时对贴壁细胞而言，能增加细胞的贴壁性，并降低培养过程中剪切力对细胞的损伤；个性化培养基可以根据各户的特殊需求减少或不使用动物源成分，从而使生物制品安全性更有保障。
9.细胞培养基偶然被冻，可否继续使用？
    答：如果细胞培养基偶然被冻，您应该自然溶解培养基并观察是否有沉淀产生。如果没有沉淀产生，培养基可以正常使用，如果出现沉淀，只能丢弃这些培养基。
10.细胞冷冻培养基之成份为何？
    答：动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含5 - 10%DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90 - 95%原来细胞生长用的新鲜培养基均匀混合。注意：由于DMSO稀释时会放出大量热能，故不可将DMSO直接加入细胞液中，必须使用前先行配制完成。
11.培养基及其它添加物和试剂可反复冻融吗？
    答：大部分添加物和试剂最多可以冻融3次，如果次数过多会将使含有的蛋发生降解和沉淀，这将会影响它的性能。
12.液体培养基的保存是冷藏好？还是冷冻好？
    答：要冷藏！！通常液体培养基在冷藏条件下可存放6个月到一年。

HL-60人早幼粒白急性血病细胞
贴壁细胞接收后的操作流程与注意事项
1.收到细胞当天尽快更换新鲜*培养基，第二天再进行消化处理
2.如果细胞收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态，请将悬浮的细胞即时离心，加15%血清的*培养基到新的培养皿/瓶继续培养观察。同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的*培养基，培养观察
3.若出现生长不均：贴壁细胞若出现分布不均，成岛状生长，可将细胞进行消化，重悬打散细胞，加入新鲜培养基进行培养

贴壁细胞常规培养传代流程（请严格遵照无菌操作）
1.吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加适量0.25%胰酶进行消化细胞（注意把握消化时间）
2.镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时（不建议消化到细胞漂浮）去掉胰酶，加6~8ml *培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散
3.取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的*培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养
4.注意培养基PH值变化情况，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%以后重复1项作或者冻存