HuH7肝癌细胞系

HuH7肝癌细胞系

【细胞缩写】    HuH-7细胞

    【细胞名称】    HuH-7(人肝癌细胞)

    【背景资料】    据说产甲胎蛋白，胰酶α抗体，血浆铜蓝蛋白，纤维蛋白原，纤维粘连蛋白等。

    【细胞消化时注意把握消化时间，消化不够会导致吹打细胞时造成损伤，一般消化时间是2-3分钟，但以镜检时大部分细胞缩回球形为准，一般2次即可将细胞吹打下来，消化不够进行细胞吹打易损伤细胞。细胞系的冻存液配方：90%FBS+10%DMSO，贴壁细胞若出现分布不均，成岛状生长，可将细胞进行消化，重悬打散细胞，加入新鲜培养基进行培养】    细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国内外著名大学建系

    【代次】    P4

    【规格】    复苏T25培养瓶(一瓶)或冻存1ml冻存管（两支）

    【细胞数】    1*10（6）

    【生物安全级别】    1

    【生物体】    人

    【组织来源】    肝

    【细胞形态】    上皮细胞样

    【细胞特性】    贴壁

    【特别注意：如使用公共实验室或者初次接触细胞培养，建议添加双抗培养，贴壁细胞收到当天切忌立刻消化，请将细胞换液后放置培养箱孵育到第二天再做消化传代，请优先选择直径6cm的培养皿进行传代培养，如果细胞为贴壁细胞，而收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态，请将悬浮的细胞即时离心，加15%血清的*培养基到新的培养皿/瓶继续培养3天；同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的*培养基培养3天。3天后若原瓶或者新瓶中的细胞都没有出现增值而是继续脱落死亡，请及时联系实验室技术人员会跟进解决】    95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

    【细胞】    细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌

    【培养条件】    详见细胞说明书

    【传代方法】    建议1:2-1:3 两天换液一次

    【冻存条件】    详见细胞说明书

    【主要文献】    请具体查阅相关发表文章

HuH7肝癌细胞系

传代操作步骤：

一、贴壁细胞传代

1.提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热，用75%酒精擦拭后再放入超净台内。

2.吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液，加少量PBS润洗细胞。

3.加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，37℃孵育，每隔2~3min显微镜下观察，待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜培养基，晃动细胞瓶，终止胰酶作用。

4.胞用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液。控制吹打的力度，避免产生大量的气泡。

5.将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养，隔天观察贴壁生长情况。

二、悬浮细胞传代

1.将细胞悬液转移到无菌离心管内，1000rpm离心5min。

2.弃去上清，加入新鲜的培养基，用吸管小心吹散沉淀，制成细胞悬液。

3.将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养。

培养的过程中，经常见到黑色的颗粒或小黑点，这种情况是怎么引起的呢？该怎么避免呢？原因：

黑点，大概有细胞本身带的，环境有的，还有人身上带进细胞间的,还有就是血清和培养基

1、如果小黑点有增殖趋势，那么就有可能是污染了，需要处理；

2、如果小黑点没有增殖趋势，且不影响细胞生长，也不影响实验的话，则可能

 a、是“黑胶虫”，黑胶虫究竟是一种生物还是非生物，本身就存在争议。有人认为是从血清中来的一种原虫，也有人认为是细菌，或是真菌，也有人认为是血清中的蛋白的结晶。“黑胶虫”可寄生于动物细胞，也可以生存于培养基中，依靠细胞和培养基中的营养为生，并随细胞传代而传代。“黑胶虫”与细胞竞争性生长，开始时对细胞并没有什么影响，但当黑胶虫的数量多到一定程度的时候， 细胞生长就会受到影响直至死亡，严重影响了科研活动的开展和进行。以前（这个至少是10年以前），很多实验室在养细胞时用国产血清，那时的血清可能质量不过关，有所谓的“黑胶虫”，但是也没有明确的鉴定。但是现在的血清，即使国产的，产品里这种现象就少见了。

 b、是细胞碎片，或血清里德沉淀析出，在做布朗运动。

 c、是核糖体，也可能是杂质ZYC3153    人肾母细胞瘤细胞    SK-NEP-1    形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3154    人肾透明细胞腺癌细胞    786-O [786-0]    形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3155    人肾透明细胞癌皮肤转移细胞    Caki-1    形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3156    人肾细胞腺癌细胞    ACHN    形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3157    人子宫内膜腺癌细胞    HEC-1-A    形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3158    人绒毛膜癌细胞    JEG-3    形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3159    人脐静脉细胞融合细胞    EA.ZY926    形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3160    人膀胱癌细胞    5637    形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3161    人输尿管上皮永生化细胞    SV-HUC-1    形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3162    人滑膜肉瘤细胞    SW 982 [SW-982, SW982]    形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3163    人膀胱移行细胞癌细胞    T24    形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3164    人T淋巴细胞白血病细胞    HuT 78    形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3165    人结直肠腺癌细胞    COLO 320DM     形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS