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IHH4人甲状腺乳头状癌细胞
复苏
1. 把冻存管从液氮中取出来，立即投入37℃水浴锅中，轻微摇动。液体都融化后（大概1-1.5分钟），拿出来喷点酒精放到超净工作台里。
2. 把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中（用培养基把冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来），1000转离心5分钟。
3. 把上清液倒掉，加1ml培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动，使培养皿中的细胞均匀分布。
4. 标好细胞种类和日期、培养人名字等，放到CO2培养箱中培养，细胞贴壁后换培养基。
5. 3天换一次培养基。
二、 细胞传代
1. 培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。
2. 把原有培养基吸掉。
3. 加适当的胰蛋白酶（能覆盖细胞就行），消化1-2分钟。
4. 细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培养基终止消化。
5. 用移液枪吹打细胞，把细胞都悬浮起来。
6. 把细胞吸到15ml的离心管中，1000转离心5分钟。
7. 倒掉上清液，加1-2ml培养基，把细胞都吹起来。
8. 根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中。一般，癌细胞分5个，正常细胞传3个。继续培养。
三、细胞冻存
把细胞消化下来并离心（同上）。用配好的冻存液把细胞悬浮起来，分装到灭菌的冻存管中，静止几分钟，写明细胞种类，冻存日期。4℃ 30min，-20℃ 30min，-80℃过夜，然后放到液氮灌中保存。
冻存液的配制： 70%的*培养基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加，边滴边摇。
要注意的就是无菌操作！
IHH4人甲状腺乳头状癌细胞
细胞培养常见问题及解决方法
问题 | 原因 | 解决方案 |
细胞生长缓慢 | 生长培养基使用不当 | 按照生产商的建议，使用相应的预热生长培养基。 |
生长培养基中血清质量差 | 使用其他批次血清。 | |
传代操作不当 | 按照生产商的建议消化时间及传代比例进行操作。 | |
换液过于频繁 | 降低换液频率，参考生产商推荐的换液频率。 | |
细胞传代次数过多 | 使用传代次数较少的健康细胞。 | |
细胞生长超过汇合状态 | 哺乳动物细胞传代应在细胞处于对数期、未达到汇合状态时进行，建议细胞密度达 80-90%传代。 | |
细胞被支原体污染 | 将细胞、培养基和试剂丢弃；新取一只冻存细胞，并且使用新的培养基和试剂。 | |
细胞复苏存活率低 | 细胞冻存不当 | 新取一只冻存细胞，并储存在液氮中。将细胞储存在液氮中，直至复苏。 |
自行制备的冻存细胞无活性 | 将细胞按照生产商推荐的密度冻存。 | |
制备冻存细胞时使用传代次数少的细胞。 | ||
严格按照生产商推荐的操作程序冻存细胞。请注意本手册推荐的冷冻程序是冻存细胞的一般流程，只能作为指导原则使用。 | ||
新取一只冻存细胞。 | ||
细胞复苏方法不当 | 严格按照生产商推荐的操作程序复苏细胞。请注意本手册推荐的解冻程序是复苏细胞的一般流程，只能作为指导原则使用。 | |
确保冷冻细胞解冻迅速，接种前用预热的生长培养基缓慢稀释细胞。 | ||
复苏培养基使用不当 | 使用生产商推荐的培养基。确保培养基使用前已经预热。 | |
细胞稀释过度 | 按照生产商的建议，将解冻后的细胞��密度接种，以改善复苏效果。 | |
处理细胞时动作不够轻柔 | 冻存和复苏过程对大多数细胞都会造成不利影 响。不要通过涡旋振荡或者用力敲打培养瓶的方法使细胞脱落(培养昆虫细胞时除外)，也不要高速离心细胞。 | |
冻存液中所用保护剂在储存过程中未避光 | 如果未避光储存，冻存保护剂会转变为对细胞有毒性的物质；新取一只冻存保护剂，重新冻存细胞。 |
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