IMR-90人胚肺成纤维细胞

IMR-90人胚肺成纤维细胞

【产品产地】ATCC
【细胞形式】冻存及复苏
【质量控制】本细胞经过了检测，不含有细菌、真菌、病毒（HIV、HBV、HCV）、支原体。
【培养条件】37℃，5% CO2，PH值7.2~7.4，无菌恒温培养。
【研究范围】本产品只提供科研使用，不可应用于治疗等其他方面。
活力检测操作步骤：
1. 配制4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100mL，用滤纸过滤，4℃保存。使用时用PBS稀释至0.4%。
2. 胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释（106 cells/mL）。
3. 取少量细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合，轻轻吹打混匀，染色2~3min。
4. 显微镜下观察，死细胞着浅蓝色并膨大，无光泽；活细胞保持正常形态，无色透明有光泽。若需计算活细胞率则将染色的细胞悬液滴入细胞计数板计数。
活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100%
注意事项：台盼蓝染细胞时，时间不宜过长。否则，部分活细胞也会着色，会干扰计数的准确性。
注意：初学者易犯错误： 1．水浴锅未预热或者未预热到37℃。 2．水浴锅内冻存管太多，导致传热不佳，使融化时间延长。 3．离心前忘记平衡，导致离心机损坏和细胞丢失。 4．一次复苏细胞过多，忘记更换吸头和吸管，导致细胞交叉污染。

IMR-90人胚肺成纤维细胞

传代操作步骤：

一、贴壁细胞传代

1.提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热，用75%酒精擦拭后再放入超净台内。

2.吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液，加少量PBS润洗细胞。

3.加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，37℃孵育，每隔2~3min显微镜下观察，待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜培养基，晃动细胞瓶，终止胰酶作用。

4.胞用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液。控制吹打的力度，避免产生大量的气泡。

5.将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养，隔天观察贴壁生长情况。

二、悬浮细胞传代

1.将细胞悬液转移到无菌离心管内，1000rpm离心5min。

2.弃去上清，加入新鲜的培养基，用吸管小心吹散沉淀，制成细胞悬液。

3.将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养。

培养的过程中，经常见到黑色的颗粒或小黑点，这种情况是怎么引起的呢？该怎么避免呢？原因：

黑点，大概有细胞本身带的，环境有的，还有人身上带进细胞间的,还有就是血清和培养基

1、如果小黑点有增殖趋势，那么就有可能是污染了，需要处理；

2、如果小黑点没有增殖趋势，且不影响细胞生长，也不影响实验的话，则可能

 a、是“黑胶虫”，黑胶虫究竟是一种生物还是非生物，本身就存在争议。有人认为是从血清中来的一种原虫，也有人认为是细菌，或是真菌，也有人认为是血清中的蛋白的结晶。“黑胶虫”可寄生于动物细胞，也可以生存于培养基中，依靠细胞和培养基中的营养为生，并随细胞传代而传代。“黑胶虫”与细胞竞争性生长，开始时对细胞并没有什么影响，但当黑胶虫的数量多到一定程度的时候， 细胞生长就会受到影响直至死亡，严重影响了科研活动的开展和进行。以前（这个至少是10年以前），很多实验室在养细胞时用国产血清，那时的血清可能质量不过关，有所谓的“黑胶虫”，但是也没有明确的鉴定。但是现在的血清，即使国产的，产品里这种现象就少见了。

 b、是细胞碎片，或血清里德沉淀析出，在做布朗运动。

 c、是核糖体，也可能是杂质ZYC3153    人肾母细胞瘤细胞    SK-NEP-1    形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3154    人肾透明细胞腺癌细胞    786-O [786-0]    形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3155    人肾透明细胞癌皮肤转移细胞    Caki-1    形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3156    人肾细胞腺癌细胞    ACHN    形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3157    人子宫内膜腺癌细胞    HEC-1-A    形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3158    人绒毛膜癌细胞    JEG-3    形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3159    人脐静脉细胞融合细胞    EA.ZY926    形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3160    人膀胱癌细胞    5637    形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3161    人输尿管上皮永生化细胞    SV-HUC-1    形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3162    人滑膜肉瘤细胞    SW 982 [SW-982, SW982]    形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3163    人膀胱移行细胞癌细胞    T24    形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3164    人T淋巴细胞白血病细胞    HuT 78    形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3165    人结直肠腺癌细胞    COLO 320DM     形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS