T/G HA-VSMC人血管主动脉平滑肌细胞
细菌破壁方法:细菌破壁是成功提取DNA的关键步骤之一。革兰氏阳性菌的肽聚糖层构成坚韧的三维立体结构,而阴性菌肽聚糖层构成疏松的二维结构,因此不同种类细菌的破壁方法不同。目前破壁方法有十二烷基磺酸钠(SDS)裂解法、溶菌酶法、反复冻融法、研磨法、超声波法等。不同细菌对溶解剂有不同的抗性,溶解细菌前需先取少量菌悬液,加一定浓度的溶解剂,看是否能溶解菌体。若SDS和溶菌酶均能溶解菌体,使用既廉价又能抑制DNase的SDS;若需用溶菌酶应加入SDS促进溶菌;如果60℃溶菌过程缓慢,可将温度提高到70~75℃,有些菌也可用脱氧胆酸盐破裂细胞膜溶解菌体。对溶解剂有抗性的菌类,可在含青霉素或甘氨酸的培养基中培养,使其不形成细胞壁。
T/G HA-VSMC人血管主动脉平滑肌细胞
发货方式:
复苏后发货:我们复苏细胞后发货,货期一周左右,免运费。(气温较好建议复苏后发货)
冻存发货(干冰运输):需额外增加干冰运费,选择干冰运输的我们发两管细胞,为了保证客户接种可靠性多发一管。(气温低于0℃须冻存发货)
细胞发货采取专业的运输包装,并选择最快捷的运输方式(顺丰速运或其他空运快递)
细胞处理方法:
一、贴壁细胞
1、 接收到细胞,肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞 100X,200X 各一张)。
2、用 75%的酒精消毒外包装,在超净工作台内打开外包装。
3、严格遵循无菌操作规范,打开细胞培养瓶。
4、37度平衡1-2小时。
5、用移液管吸取培养基,到50ml离心管中,剩下细胞密度达到80%至90%可以传代,如没有达到添加6ml新鲜培养基继续培养。
6、如果肉眼检查上清有细胞,对50ml上清进行离心收集细胞,如果细胞连片状态,弃掉上清对收集的细胞进行胰酶消化(1ml胰酶37度),接种培养。
二、悬浮细胞
1、接收到细胞,肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞 100X,200X 各一张)。
2、用 75%的酒精消毒外包装,在超净工作台内打开外包装。
3、严格遵循无菌操作规范,打开细胞培养瓶。
4、细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出(严禁直接倾倒)。
5、1000rpm,5min 离心,用吸管小心吸出上清,加入培养基,重悬细胞。
6、将重悬好的细胞转入六孔板或者细胞培养瓶种,加入新鲜培养基,置于 37℃,5%CO2 培养(大部分细胞)。