HT144人恶性黑色素瘤细胞

HT144人恶性黑色素瘤细胞

组织来源：皮肤
培养条件：McCoy 5a+10%FBS
形      态：贴壁；成纤维细胞样

1. 在HT-144细胞还没有*长满的时候就要传代，覆盖瓶底大约70%的时候就开始传代；

2.不存在消化时间太长的说法，我的细胞所有的细胞都在37°消化5-10分钟，你的一分钟肯定不会有问题；

3.明确你的消化液里面有没有EDTA，这个东西会很强烈地抑制细胞贴壁，如果有的话，你要用新的瓶子传代，原来的培养瓶或者培养皿都不要了，这样会好些，如果你要反复使用培养皿的话，要用大量的PBS洗，再用含血清的培养基洗一次才能继续用；

4.你消化HT-144细胞之后有没有离心清洗细胞，细胞消化下来之后要用含10ml血清的培养基离心洗一次；

0.05%的胰酶还是0.25%的胰酶原理是底浓度胰酶作用时间长些，细胞能尽量散些是目的，胰酶保存的好，效果就好。

消化之前先用PBS洗两次，然后加0.05%的胰酶消化2min，然后把胰酶吸弃，利用余下的胰酶消化3-5min（室温或培养箱），HT-144;人恶性黑色素瘤细胞；HT-144细胞这期间每隔一分钟在显微镜下观察，看到细胞差不多都变圆了、且侧立细胞有滑落的趋势，加2ml培养基吹打，吹成单细胞悬液。我的细胞这样差不多就能吹散了。

HT-144细胞一团一团的，是传代的时候没吹散。37度消化4分钟，拿前面较细的1ml枪头吹的，然后就差不多能成单细胞了。你可以吹完后把它转移到离心管中，让它自然沉降8-10分钟，然后取上层的细胞传代，情况会好很多。

细胞聚团还有一种可能是您使用的胎牛血清营养成份不够，建议复苏一只新的细胞再培养。

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