胎牛血清

 　　GIBCO胎牛血清细胞冻存步骤：

　　1、在冷冻管上标记好日期、研究者姓名、细胞数、细胞传代数和细胞类型（以及任何其他有用信息，比如遗传修饰）。

　　2、如果细胞贴壁，则去除细胞培养基，用 PBS 洗涤，加入足量胰蛋白酶覆盖细胞并在 37°C 培养箱中孵育约 2 分钟。在细胞培养基中重悬细胞并移入 50 mL Falcon 管中。

　　3、如果细胞为悬浮状态，只需将所需体积细胞直接移入 50 mL Falcon 管中。

　　4、用血细胞计数器进行细胞计数以确定其活力。用于冷冻保存的细胞活力至少应为 75%。

　　5、在室温下以 1,000 rpm 离心 5 分钟。

　　6、去除上清液，轻轻散开沉淀物。

　　7、添加冷冻培养基至所需的细胞密度。对于哺乳动物细胞，所需细胞密度通常为10^6/mL 冷冻培养基。在室温下，细胞不应在冷冻培养基中超过 10 分钟。

　　8、在各冷冻管中各分装 1 mL，并盖紧盖子。

　　9、室温下将冷冻管移至 CoolCell 快速冷冻机中，然后放入 -80°C 冰箱中。CoolCell 快速冷冻机将确保温度以 1°C/分钟稳步下降。

　　10、大约 24 小时后，从 CoolCell 快速冷冻机中取出冷冻管并转移到液氮中长期储存。

　　更换GIBCO胎牛血清有技巧：

　　a.不同来源或不同批次GIBCO血清的更换：在一个批次的血清快使用完毕，需更换使用不同来源或不同批次的血清时，宜让细胞有一个逐步适应新血清的过程，这样就几乎不会因为更换血清而影响细胞的生长状态。具体的方法是，在初始使用旧批次血清的情况下，逐渐增加不同来源或不同批次血清的比例，例如把不同来源或不同批次血清的比例逐步调整为0%、30%、60-70%、100%。这样经过约3代细胞的逐渐适应，细胞通常会在新来源或新批次的血清中生长良好。

　　b.从GIBCO血清更换成新生牛血清：有的些细胞，如HEK293、HEK293T、HeLa、CHO-K1、NIH3T3等常见细胞株通常是可以用新生牛血清培养的。如果之前是使用胎牛血清，想更换为新生牛血清培养，也需要让细胞有一个逐步适生牛血清的过程。例如把新生牛血清的比例逐步调整为0%、30%、60-70%、100%。对于不太确定是否适合新生牛血清培养的细胞。

血清真假辨别：

　　一、外观

　　拿到血清，先接触的是血清外观，对于缺少细胞培养经验的人来说，外观的判断尤为重要

　　1、GIBCO血清颜色

　　根据血红蛋白含量的不同，胎牛血清可表现出黄色或红色，我国的细胞培养用血清标准是不高于20mg/dl，实际上，血红蛋白含量的高低对血清并无直接影响，这个指标的意义在于能体现出采血过程的严谨规范程度，良好的操作能降低血清的溶血。

　　假的血清的采血点很分散，大多是由屠户采血后马上离心收集，所以很少会有溶血，表现出明亮的蜡黄色，当然，假的血清也很少有标准意义上的胎牛血清。

　　进口血清或多或少总有点溶血，因为真正的血清凝血功能差，红细胞容易破裂。

　　总的来说，假的的血清呈现出蜡黄。进口的血清，质量好的呈现出谈黄、微红色，差点的呈现出橘红色或鲜红色。当然，热灭活血清或保存不当的血清，由于血红蛋白的破坏氧化，会呈现出暗红，甚至咖啡色。

　　2、GIBCO血清沉淀

　　很多血清客户，会发现进口血清有沉淀，从而怀疑血清的质量问题，这是没有根据的。

　　血清中的沉淀是由纤维蛋白的凝聚产生，对血清质量没有任何影响，沉淀的产生原因很多，和厂家的加工生产方式密切相关。

　　假的的血清，大多来自北方，由于价格低廉，保存环境都不好，从采血、冷冻、运输到生产会经过多次冻融，每次冻融过程，就会析出部分纤维蛋白沉淀，这样，血清成品过滤后看起来反而更加的“干净”，很少有沉淀产生。

　　GIBCO血清过滤分装前很少会反复冻融，生产后的成品也是清澈的，但随着时间的推移，血清中的大量纤维蛋白会析出形成沉淀。当然，进口的新生牛血清，一般牛龄都在2周左右，血清中的各种蛋白含量明显偏高，生产后血清可能会浑浊，甚至有大量沉淀。

　　当然，购买回来的血清都是冰冻状态，使用时需要融化，融化过程好在温度较低的状态下慢慢进行，否则沉淀相对较多，虽然沉淀并不直接影响血清的质量，但对细胞的显微观察有一定的阻碍。