小鼠巨噬细胞Ana-1使用说明书

小鼠巨噬细胞；Ana-1使用说明书

品名称 ：小鼠巨噬细胞；Ana-1
生长特性 ： 贴壁生长

形态特性

生长特性 悬浮生长

特征特性

培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 胎牛血清，10%

传代方法 1:2。3天内可长满。

传代情况 PN

冻存条件 *培养基+8%DMSO

支原体检测 阴性

STR

同工酶

染色体应用：
1、细胞因子检查试剂盒，如白介素、肿瘤坏死因子、干扰素、转化生长因子、凋亡因子等等；  2、心肌梗塞检查ELISA试剂盒，如肌钙蛋白、肌红蛋白、C-反响蛋白等等；
3、内分泌检查ELISA试剂盒，如甲状腺、胰腺、性激素、孕酮、睾酮、生长激素、生长抑素、催乳素、促肾上腺皮质激素等等；
4、肝纤维化检查ELISA试剂盒，如纤维连接蛋白、胶原、基质金属蛋白酶，层粘蛋白等等；
5、本身免疫检查，如甲状腺、抗核抗体、DNA、抗胰岛细胞抗体、蛋白酶、角蛋白抗体、
核糖体蛋白抗体、抗聚角蛋白微丝蛋白抗体、抗平滑肌抗体等等。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM，常温条件下离心5分钟，少量保存上清液（防止细胞吸走），加入部分新鲜培养基，吹打均匀后，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO摇匀后进行冻存。
培养操作步骤 
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中； 
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。