CBRH7919大鼠肝癌细胞

CBRH7919大鼠肝癌细胞

目的体外观察大鼠CBRH-7919肝癌细胞诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)向血管内皮细胞分化及其机制。方法分离Wistar大鼠骨髓间充质干细胞,鉴定后构建BMSC与肝癌细胞的共培养模型,分3组:共培养组、单独BMSC组及含有抗VEGF抗体的共培养组,48 h和72 h后,免疫荧光法检测VEGFR2和CD31的表达,半固体培养基检测毛细血管样结构的形成。结果 BMSC表型鉴定为CD29+/CD44+/CD45-/CD34-,48 h后,共培养组BMSC少量表达CD31和VEGFR2,阳性率分别为(11.50±1.87)%和(12.33±1.37)%,且出现毛细血管样结构(8.00±0.05),72 h后,共培养组CD31和VEGFR2表达明显增多,阳性率分别为(24.43±2.23)%和(24.86±0.69)%,毛细血管样结构也明显增加(22.00±0.02),而单独BMSC组和含有抗VEGF抗体的共培养组均阴性。结论血管内皮生长因子(VEGF)在大鼠CBRH-7919肝癌细胞诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化成血管内皮细胞过程中起了关键作用。

CBRH7919大鼠肝癌细胞

1)培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决；2)细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以离心去掉，留10ml培养液培养观察，细胞生长至汇合度80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决；3)对于生长缓慢的贴壁细胞：可采用适当的提高培养基中血清浓度，或隔日换液的方法来保证细胞的状态和生长速度；4)对于生长不均的贴壁细胞：在培养过程中若出现细胞分布明显不均时(即某一区域细胞已重叠生长，而旁边则为一块空白)，此时可将细胞进行消化，重新打散，贴壁，加入新培养基进行培养。
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞传代注意事项：①传代培养时注意无菌操作并防止细胞间的交叉污染。所有操作尽量靠近酒精灯火焰。每次进行一种细胞的操作。每种细胞使用一套器材；②每天观察细胞形态，掌握好细胞是否健康的标准：健康细胞的形态饱满，折光性好，生长致密时即可传代；③如发现细胞有污染迹象，应立即采取措施，一般应弃置污染的细胞，如果必须挽救，可加含有抗生素的BBS或培养基反复清洗，随后培养基中加入较大量的抗生素，并经常更换培养基。传代细胞的建系和维持：细胞系的维持通过换液传代再换液、再传代和细胞种子冻存来实现。对每一个细胞系来说都有其自身的特点，要做好建系的维持必须记录好细胞档案,换液传代和做好细胞系的管理工作。培养细胞的冻存及复苏：细胞低温冻存是培养室常规工作和通用技术。细胞冻存在-196℃液氮中，储存时间几乎是无限的。细胞冻存及复苏的原则是慢冻快融。

细胞冻存的步骤：1)选择处于对数生长期的细胞，在冻存前一天换液。将多个培养瓶中的细胞培养液去掉，用0.25% 胰蛋白酶消化。适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液。悬浮生产细胞则不要消化处理。然后将细胞收集于离心管中离心(1000r/min，10分钟)；2)去上清液，加入含20%小牛血清的*培养基，于4℃预冷15分钟后，逐滴加入已无菌的DMSO或甘油，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，细胞浓度为5×106～1×107/mL之间。(冻存培养液的配置是不是一定要用小牛血清呢？答案是不一定的，具体要看培养的细胞类型来选择；3)将分装上述细胞悬液于2ml冻存管中，每管0.25ml。冻存管要将盖子盖紧，并标记好细胞名称和冻存日期，同时作好登记(日期、细胞种类及代次、冻存支数)；4)将装好细胞的冻存管放到冻存盒中，-80℃冰箱过夜。；如果有程序降温器(放在-80℃冰箱过夜，放入液氮罐);或者可以在4℃，2h;然后转到-20℃，2h;-80℃，2h;放入液氮罐；5)细胞冻存在液氮中可以长期保存，但为妥善起见，冻存半年后，取出一只冻存管细胞复苏培养，观察生长情况，然后再继续冻存。